此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率(1℃/分 钟)冷冻,直至—150℃,再将这些小管储存在—150~-196℃的液氮中。 超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油 (10%) 、二甲亚砜(5%)和培养液制成的混合剂保管大都的细胞株。

这种储存办法比冻干法需求更 多的经费,包含为了保持储存温度所必要的劳动力和液氮等。
1 资料 病毒超低温保管所需资料有:热收缩塑料管(NuncCryoflex) ,液氮罐,防 护手套和面罩,记号笔,气体喷灯,装液氮的保温瓶。
2 办法
(1)剪一段两头各超出冷冻管长度 2cm 的热收缩塑料管。
(2)将富含弄清病毒悬液(安排培养的上清培养基,或安排培养基内的细 胞溶解产品均可)冰浴几分钟,用灭菌移液管将 0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到 冷冻管内,并将盖子拧紧。
(3)将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部,刺进正确的标签。
(4)用喷灯当心加热热收缩塑料管,并使之包住冷冻管。注意不要用太高 的温度加热热收缩塑料管。
(5)再当心加热热收缩塑料管的两头,用大号镊子夹紧管的端口至彻底密 封。
(6)将密封好的冷冻管疾速在装有液氮的保温瓶中冷冻(操作时需求戴面 罩和手套) 。
(7)将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内,一起记载样品的具体的存 放方位、试验编号和寄存日期等。
(8)需求用时,敏捷从液氮罐内取出所需样品,并投入 37℃水浴箱中冻结 后,用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时 不需求除掉热收缩塑料管。