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液氮罐超低温保存方法详述

时间:2018-10-21 16:36 来源:成都金凤液氮罐 作者:成都金凤液氮罐
      微生物都可以用超低温来保管, 超低温保管法是适用范围广泛的微生物保管法。 需求杂乱养分的微生物种, 如用其他的储存办法不能坚持其生机 (如 植物的病原性真菌) ,一般可用超低温的办法保管( ATCC1983;Halliday , Baker1985) 。


      此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率(1℃/分 钟)冷冻,直至—150℃,再将这些小管储存在—150~-196℃的液氮中。 超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油 (10%) 、二甲亚砜(5%)和培养液制成的混合剂保管大都的细胞株。



液氮罐超低温保存方法详述
 
      这些化学 试剂进入细胞内可防止内膜的冷冻损伤。 储存在低温容器内的细胞复苏时有必要当心操作。当小管被加热时,所构成的 冰晶会将细胞杀死, 正确操作就可防止这种事端。只需敏捷将样品冻结就能削减 生机的丢掉,做法是:将封口的小管敏捷放入 37℃的水中,直至一切的冰消融, 然后翻开管口,将内容物移入培养基。 超低温保藏的微生物有必要一直储存在温度十分低的环境中,因而需求液氮 罐。在长时间储存的过程中有必要常常注意弥补液氮。

  这种储存办法比冻干法需求更 多的经费,包含为了保持储存温度所必要的劳动力和液氮等。

1 资料 病毒超低温保管所需资料有:热收缩塑料管(NuncCryoflex) ,液氮罐,防 护手套和面罩,记号笔,气体喷灯,装液氮的保温瓶。

2 办法
(1)剪一段两头各超出冷冻管长度 2cm 的热收缩塑料管。
(2)将富含弄清病毒悬液(安排培养的上清培养基,或安排培养基内的细 胞溶解产品均可)冰浴几分钟,用灭菌移液管将 0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到 冷冻管内,并将盖子拧紧。
(3)将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部,刺进正确的标签。
(4)用喷灯当心加热热收缩塑料管,并使之包住冷冻管。注意不要用太高 的温度加热热收缩塑料管。
(5)再当心加热热收缩塑料管的两头,用大号镊子夹紧管的端口至彻底密 封。
(6)将密封好的冷冻管疾速在装有液氮的保温瓶中冷冻(操作时需求戴面 罩和手套) 。
(7)将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内,一起记载样品的具体的存 放方位、试验编号和寄存日期等。
(8)需求用时,敏捷从液氮罐内取出所需样品,并投入 37℃水浴箱中冻结 后,用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时 不需求除掉热收缩塑料管。