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液氮罐超低温保存方法详述

时间：2018-10-21 08:36:43 来源： 作者：admin
      微生物都可以用超低温来保管， 超低温保管法是适用范围广泛的微生物保管法。 需求杂乱养分的微生物种， 如用其他的储存办法不能坚持其生机 （如 植物的病原性真菌） ，一般可用超低温的办法保管（ ATCC1983；Halliday ， Baker1985） 。


      此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率（1℃／分 钟）冷冻，直至—150℃，再将这些小管储存在—150～－196℃的液氮中。 超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油 （10％） 、二甲亚砜（5％）和培养液制成的混合剂保管大都的细胞株。


液氮罐超低温保存方法详述
 
      这些化学 试剂进入细胞内可防止内膜的冷冻损伤。 储存在低温容器内的细胞复苏时有必要当心操作。当小管被加热时，所构成的 冰晶会将细胞杀死， 正确操作就可防止这种事端。只需敏捷将样品冻结就能削减 生机的丢掉，做法是：将封口的小管敏捷放入 37℃的水中，直至一切的冰消融， 然后翻开管口，将内容物移入培养基。 超低温保藏的微生物有必要一直储存在温度十分低的环境中，因而需求液氮 罐。在长时间储存的过程中有必要常常注意弥补液氮。

  这种储存办法比冻干法需求更 多的经费，包含为了保持储存温度所必要的劳动力和液氮等。

1 资料 病毒超低温保管所需资料有：热收缩塑料管（NuncCryoflex） ，液氮罐，防 护手套和面罩，记号笔，气体喷灯，装液氮的保温瓶。

2 办法
（1）剪一段两头各超出冷冻管长度 2cm 的热收缩塑料管。
（2）将富含弄清病毒悬液（安排培养的上清培养基，或安排培养基内的细 胞溶解产品均可）冰浴几分钟，用灭菌移液管将 0.2ml 冰浴过的上清悬液分装到 冷冻管内，并将盖子拧紧。
（3）将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部，刺进正确的标签。
（4）用喷灯当心加热热收缩塑料管，并使之包住冷冻管。注意不要用太高 的温度加热热收缩塑料管。
（5）再当心加热热收缩塑料管的两头，用大号镊子夹紧管的端口至彻底密 封。
（6）将密封好的冷冻管疾速在装有液氮的保温瓶中冷冻（操作时需求戴面 罩和手套） 。
（7）将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内，一起记载样品的具体的存 放方位、试验编号和寄存日期等。
（8）需求用时，敏捷从液氮罐内取出所需样品，并投入 37℃水浴箱中冻结 后，用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。拧开冷冻管的盖子时 不需求除掉热收缩塑料管。